Diabetologia：激活但功能受损的失忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肝细胞自身特异性到显现1M-冠心病诊断副作用的困难重重部将在学童时期就有极好的所述，多个肝细胞自身特异性特质性的学童当除此以外70%在小鼠转换后10月内患上冠心病，而随访15年的学童这一比部将减低到84%。来得之下，占总诊断1M-冠心病一半以上的M-1M-冠心病的得病机制还没得到必要的研究成果。

越来越多的人开始采用分期系统来定义1M-冠心病的困难重重：个锥体在显现多种肝细胞自身特异性时进入第1过渡期，显现高血压异常时进入第2过渡期，显现副作用时进入第3过渡期。一些多发肝细胞自身特异性特质性的个锥体，在1期和2期，困难重重较更慢，并发展为得病的1M-冠心病。我们以后所述了一两组在首次检测到多种肝细胞自身特异性样本后大概10年无冠心病的更更慢困难重重者，这两组病征人数不及，但特质比起说明。随后，我们断定肝细胞自身蛋白质特异性CD8+T细胞会反不宜在困难重重较更慢的病征当中大锥体不共存，但在近期得病和仍然共存的冠心病病征当中很容易检测到。这或许表明，与困难重重病征来得，这些病征血栓反不宜的适度增强。

早期研究成果表明，尽管适度性T细胞会(Treg)为数正常，但冠心病病征共存一些功能缺陷，其当中包括对IL-2的反不宜灵活性降低。此外，冠心病病征当中的效不宜CD4+T细胞会或许对适度更具抵抗性，展示出为效不宜T细胞会的减缓弱化，大自然消除的Treg和锥体外消除的可借Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞会当中IL-2反不宜弱化。本研究成果的目的是所述了CD4+适度性T细胞会(Treg)在一小群近乎较更慢困难重重者当中的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以老年人为基础的纵向研究成果，在21岁以下出院的病征亲属当中健康检查1M-冠心病的危险因素。我们以后所述了仍然较更慢困难重重者的特质，他们保持良好多重肝细胞自身特异性特质性超过10年，但没显现冠心病的诊断副作用，更慢性或非透过性血栓。随后，10名继续保持良好无冠心病并希望提供大量血液样本的较更慢困难重重者纳入T和B细胞会功能归纳。在目前的研究成果当中，8名更慢困难重重者(SP两组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身特异性特质性。所有的组织者都属于1M-冠心病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身特异性对某些蛋白质的水痘，然而，一名病征已经属于2期大概6年，但没显现诊断副作用，一名病征被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳当中对该NADPH透过了原则上评估。复合外周血单个核能细胞会(PBMCs)，采行多参数流式细胞会精和T细胞会减缓检验评估NADPH当中Treg的基频、表M-和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和紧接)透过无监督聚类归纳，评估Treg表M-。

结果：与肥胖NADPH来得，来自更慢困难重重锥体的失忆CD4+T细胞会的监督聚类看出，激来生的失忆CD4+ Treg基频减低，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)表述减低有关。一名HbA1c上升时的病征与困难重重较更慢者和冗余的准确部将来得，Treg谱有所各不相同。功能归纳表明，与肥胖NADPH来得，来自较更慢困难重重锥体的Treg介导的CD4+效不宜T细胞会减缓明显破损。展示出为对效不宜CD4+T细胞会CD25和CD134表述的减缓减低。

布1 集中的表M-归纳看出，CD4+Treg亚M-在更慢困难重重字段当中减低。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的来生CD4+CD45RA -细胞会上。根据标示物表述断定出10个元簇:失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)采用9个各不相同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个链表均是由一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在链表两组区域内剪裁。每个链表当中的饼布指出单个标示的表述层次。(b)每个元聚类的热布，以看出整锥体标示表述。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起重元素为每个metacluster筒该线布(重元素> 0.05%)确定为HD和SP两组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞会(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞会(l)。浅蓝色白点均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 采用CITRUS的估测证实，Treg基频的减低是困难重重较更慢的标志。分级门控(a - f)和柑桔归纳(g-k)比起SP组织者和冗余的HD组织者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的权威性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR表述透过复合，三维FlowSOM群锥体。(b) HD(网纹)和SP(黑斑)两组以及NADPHSP 606(浅蓝色)当中CD25+ cd127的基频汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控侄集的筒该线布;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风速着色，圆圈厚实的簇被识别为SP和HD字段之间的各不相同。(j)筒该线布看出了在SP(黑斑)和HD(灰点)两组当中，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比起重元素(比部将)。(k)直方布看出每个簇的表M-(暗红色)和Treg标示比起表述与背景表述(暗红色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇当中标示的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验

布3 与肥胖献血者来得，困难重重较更慢者失忆treg的GITR减低。每个失忆CD4+T细胞会元簇(失忆T细胞会_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞会;HLA-DR + GITR +失忆T细胞会;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述标示的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的表述热布(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇当中所有HD(蓝灰色)、所有SP(暗红色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR表述联结，看出直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有NADPH包括，p< 0.05(暗红色)NADPHSP 606和冗余的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表述，从分级门控，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(暗红色)和SP 606(浅蓝色)联结，看出直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检验

布4 来自较更慢困难重重的CD4+ treg细胞会依靠效不宜CD4+T细胞会的灵活性降低。SP两组用暗红色的该线和白点指出，HD两组用紫色的该线和白点指出，浅蓝色的该线/白点指出NADPHsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(不宜答者)被标示为CFSE, Treg按观察的比部将滴定。用抗CD3 /28微珠来生化细胞会，指导3天后透过流式细胞会精检测。(a-d)与CD4+不宜答者比起不宜的treg指导(增生)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不宜答者指导。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE减缓多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓多于。采用特质性对照(激来生的响不宜细胞会则有treg)计算减缓多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

布5 效不宜CD4+T细胞会对较更慢困难重重的T细胞会来生化的减缓更敏感。SP两组用暗红色的该线和白点指出，HD两组用紫色的该线和白点指出，浅蓝色的该线/白点指出NADPHsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会透过分选。CD4+CD25−(不宜答者)被cfsel标示，treg按观察的比部将滴定。用抗CD3 /28微珠来生化细胞会，指导3天后透过流式细胞会精(CD25反染)和细胞会因侄归纳。HD Treg与HD、SP或sp606不宜答者共同指导。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE减缓百分部将(b)。(c,d) CD25减缓百分部将(c)和CD134减缓百分部将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导当中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

论证：我们得出的论证是，来自较更慢困难重重侄的来生化失忆CD4+Treg在GITR表述当中得到了扩展和多样化，强调了必要性研究成果Treg在1M-冠心病风险个锥体当中的异质性的必要性。

原文应是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28